Il s’agit d’un microscope qui nous permet d’observer les images conventionnelles et les contrastes avec fluorescence, il convient de noter, qu’un microscope optique traditionnel est utilisé, mais avec de petites spécifications qui permettent de lui adapter le système optique par fluorescence ; cette caractéristique est appelée « EPI fluorescence » parce qu’il est inséré au-dessus du système optique ou des objectifs d’augmentation, travaillant par réflexion lumineuse.
Le microscope conventionnel doit posséder certaines caractéristiques pour que l’adaptation soit possible, sinon, lorsque l’adaptation est nécessaire, elle peut ne pas être réalisable ; pour éviter cela, n’hésitez pas à consulter notre gamme de microscopes via le lien suivant ICI nos conseillers vous assisteront ; Les accessoires nécessaires pour un EPI fluorescent sont constitués d’une source d’alimentation électrique, d’une douille comprenant une lampe à vapeur de mercure, d’un système de collecte de lumière et de filtres à fluorescence spécifiques.
Avantages de la microscopie de fluorescence
Au moment où la microscopie de fluorescence a commencé la révolution dans la biologie cellulaire, ce qui a permis d’observer les images de cellules vivantes, marquage multiple d’organites individuels et complexes macromoléculaires à travers des sondes fluorescentes synthétiques et génétiquement codées ; cette technique nous permet d’obtenir des images de la distribution d’une seule espèce moléculaire.
La microscopie par fluorescence élargit le champ d’application de la microscopie, en l’utilisant pour contrôler l’emplacement des composants intracellulaires marqués avec des fluorophores spécifiques. Ainsi que leurs coefficients de diffusion associés, leurs caractéristiques de transport et leur interaction avec d’autres biomolécules. Également pour observer les variables environnementales localisées, permet d’étudier le pH, la viscosité, l’indice de réfraction ; les concentrations ioniques, le potentiel membranaire et la polarité du solvant dans les tissus et cellules vivants.
Comment fonctionne un microscope à fluorescence
La première chose est de préparer l’échantillon avec une substance fluorescente qui a pour nom fluorophore, puis celui-ci sera éclairé à travers la lentille avec une lumière à haute énergie. La lumière sera absorbée par le fluorophore et provoquera l’émission de lumière avec une faible énergie et une longue longueur d’onde. Cette lumière fluorescente peut être séparée du rayonnement qui l’entoure en utilisant des filtres conçus pour cette longueur d’onde spécifique, permettant à l’observateur de visualiser uniquement ce qui est fluorescent.
Le diviseur de faisceau dichroïque et les filtres d’excitation et d’émission sont sélectionnés de telle sorte que l’excitation spectrale soit compatible avec les caractéristiques d’émission, du fluorophore utilisé pour marquer les échantillons et c’est ainsi que la distribution d’une seule couleur ou fluorophore est détectée à ce moment-là. Pour observer des images multicolores, vous devez combiner plusieurs images d’une seule couleur.
Une partie du microscope à fluorescence
- Un filtre d’excitation.
- Un miroir dichroïque ou diviseur de faisceau.
- Un filtre d’émission.
- Une source lumineuse (qui peut être une lampe à arc au xénon, une lampe à vapeur de mercure, des LED haute puissance ou des lasers).
- Un jeu d’objectifs.
- Une lentille oculaire.
- Un scénario pour contenir l’échantillon.
- Un détecteur.
Inconvénients de la microscopie de fluorescence
Le photoblanchiment résultant de l’éclairage des fluorophores peut affecter gravement la durée d’observation d’un échantillon par microscopie à fluorescence. Cette technique utilisée dans les cellules vivantes est susceptible d’augmenter leur toxicité, c’est-à-dire que la molécule fluorescente peut produire des agents réactifs spécifiques lorsqu’elle est éclairée, ce qui augmente encore l’effet phototoxique.
Bien qu’à travers la fluorescence on puisse observer un échantillon de tissu avec une coloration d’ADN fluorescent. Cela pourrait montrer l’organisation de l’ADN dans les cellules, mais cela ne peut rien révéler sur la morphologie cellulaire.
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