La spectrofluorométrie est la science qui analyse la fluorescence d’un échantillon. Cette science, appliquée par un dispositif appelé Fluoromètre, est un instrument qui mesure et étudie les propriétés des composés chimiques, dans le but de déduire des informations sur les éléments luminescents.
En général, les propriétés peuvent être étudiées en fonction du groupement des différentes espèces et/ou de l’environnement chimique de l’échantillon, à travers des analyses quantitatives et qualitatives.
Ce dispositif fonctionne à travers un faisceau de lumière ultraviolette, qui stimule les électrons des molécules de certains composés, et induit l’émission de lumière d’une moindre énergie, généralement de la lumière visible (mais pas nécessairement).
Enfin, il a une multitude d’applications pratiques, du simple parement fluorescent aux études en chimie analytique. Dans la nature, il y a plusieurs échantillons d’entités qui manipulent la fluorescence et en particulier la chimioluminescence, pour attirer de la nourriture ou des partenaires, ou pour effrayer les prédateurs.
Conceptualisation de la spectrofluorométrie
Généralement, c’est la science qui étudie les espèces possédant des états électroniques d’intérêt, et un état électronique excité de plus grande énergie. Dans chacun, il y a différents états vibrationnels. Pour connaître les états de la science de la spectrofluorométrie, il est fait par la stimulation de l’échantillon, par l’absorption d’un photon de lumière, de sa phase électronique à l’un des différents états vibrationnels. Ces éléments provoquent des émissions et perdent l’énergie vibrationnelle, jusqu’à ce que le changement le plus bas de la période électronique stimulée soit obtenu. Ainsi, en analysant les différentes fréquences de lumière émise par la spectrofluorescence, ainsi que leurs intensités relatives, on peut établir la disposition des différents niveaux de vibration.
En spectrofluorométrie, deux types généraux d’instruments sont utilisés :
- Fluoromètre filtrant : qui utilise des filtres pour bloquer la lumière incidente, et la lumière fluorescente.
- Spectrofluoromètre : ils sont utilisés pour monochromateurs de réticule de diffraction, et isoler la lumière incidente et la lumière fluorescente.
Les deux types d’instruments, utilisent des projets de lumière d’une source de stimulation, qui passe par un filtre ou monochromateur, et influe sur l’échantillon d’étude.
Applications et utilisation
La spectrofluorescence est utilisée dans les études biochimiques, médicales, chimiques, environnementales, par exemple, dans le suivi (hydrogéologie) et la recherche sur les composés organiques. Il a également été appliqué pour différencier les tumeurs malignes de la peau des tumeurs bénignes.
Les fluoromètres sont chargés de mesurer les changements émis par les échantillons. Il y a deux types, qui sont: l’émission et l’excitation.
- Pour produire un spectre d’émission, le spectre lumineux est capté pour une longueur d’onde d’excitation donnée.
- En revanche, pour produire un spectre d’excitation, la lumière émise par la luminescence est observée à une longueur d’onde donnée, pour différentes longueurs d’onde d’excitation.
Les fluoromètres, détectent des concentrations de molécules fluorescentes aussi faibles que 1/1,000,000,000 10-18.
En résumé, les spectrofluoromètres, qui apportent généralement une meilleure compréhension et un niveau d’efficacité plus large, détectent de nombreux processus biologiques et chimiques. Il existe souvent des solutions de remplacement fluorescentes pour des applications telles que la viabilité cellulaire et la quantification des acides nucléiques.
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