L’électrophorèse sur gel est une technique de laboratoire utilisée en génétique pour séparer des mélanges contenant de l’ADN, de l’ARN et d’autres protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaire respectives. L’ADN, l’ARN ou les protéines qui doivent être séparés dans cette méthode sont passés à travers un gel contenant de petits pores. Les molécules sont entraînées à travers le gel par un champ électrique.
Électrophorèse horizontale sur gel
L’électrophorèse horizontale sur gel utilise la théorie de base pour la séparation des molécules d’ADN, d’ARN ou de protéines en fonction de leur taille et de leur charge moléculaire respectives. Dans cette technique, le gel est présent dans une orientation horizontale et est immergé dans un tampon qui est continu. Le gel d’agarose est utilisé pour séparer la boîte de gel en deux compartiments. Une extrémité de la boîte de gel contient une anode, tandis que l’autre extrémité contient une cathode. Lorsqu’un courant est appliqué, le tampon utilisé dans cette technique permet la création d’un gradient de charge. Lorsque la charge est appliquée, le gel a tendance à chauffer.
Le tampon fonctionne également comme un liquide de refroidissement, maintenant la température à des niveaux optimaux. La recirculation du tampon courant empêche la formation d’un gradient de pH. Un système de tampon discontinu ne peut pas être utilisé dans l’électrophorèse sur gel horizontale car les deux compartiments du système de gel se connectent avec le tampon en cours d’exécution.
Dans l’électrophorèse horizontale sur gel, l’acrylamide ne peut pas être utilisé car la boîte de gel est exposée à l’oxygène. En raison de la présence d’oxygène, la polymérisation de l’acrylamide est inhibée, ce qui interfère avec la formation de gel. L’électrophorèse horizontale sur gel est une méthode sans effort utilisée dans la séparation de l’ADN et de l’ARN.
Électrophorèse verticale sur gel
La technique d’électrophorèse sur gel verticale fonctionne selon la théorie primaire de l’électrophorèse sur gel, mais est considérée comme plus complexe que la méthode d’électrophorèse sur gel horizontale. Cette technique utilise un tampon discontinu. Une cathode est située dans la chambre supérieure et l’anode est située dans la chambre inférieure. Les électrodes présentes dans chaque compartiment fournissent le champ électrique requis. Une fine couche de gel est versée entre les deux plaques de verre montées. Par conséquent, la partie supérieure du gel est immergée dans la chambre supérieure et la partie inférieure du gel est immergée dans la chambre inférieure. Une fois le courant appliqué, une petite partie du tampon se déplace vers la chambre inférieure de la chambre supérieure à travers le gel.
Dans l’électrophorèse verticale sur gel, le tampon ne traverse que le gel. Cela permet un contrôle précis du gradient de tension pendant l’étape de séparation. Le gel d’acrylamide peut être utilisé car les compartiments ne sont pas exposés à l’oxygène de l’air. En raison de la taille plus petite des pores du gel d’acrylamide, une séparation précise peut être obtenue avec une résolution plus élevée.
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