Un spectrophotomètre est un équipement utilisé pour mesurer l’absorbance d’un échantillon, en fonction de la longueur d’onde du rayonnement électromagnétique. Il existe plusieurs types de spectrophotomètres. Ceux-ci sont regroupés selon le type d’échantillon analysé; Il existe l’absorption atomique et l’absorption moléculaire (communément appelée spectrophotomètre UV-VIS).
En général, un spectrophotomètre est composé de 4 parties principales : une source, un monochromateur, un séparateur de faisceau, une zone d’échantillonnage et un détecteur. Il possède également des éléments optiques tels que des lentilles ou des miroirs, qui transmettent la lumière dans tout l’équipement.
La spectroscopie UV-VIS est une technique analytique qui mesure la quantité de longueurs d’onde discrètes de lumière UV ou visible qui sont absorbées ou transmises à travers un échantillon par rapport à un échantillon de référence ou à blanc. Cette propriété est influencée par la composition de l’échantillon, fournissant potentiellement des informations sur ce qu’il y a dans l’échantillon et à quelle concentration.
Comment fonctionne un spectrophotomètre UV-VIS ?
Le spectrophotomètre UV-VIS est basé sur le processus d’absorption du rayonnement ultraviolet-visible (rayonnement d’une longueur d’onde comprise entre 200 et 780 nm) par une molécule. L’absorption de ce rayonnement provoque la promotion d’un électron à un état excité. Les électrons qui sont excités lors de l’absorption d’un rayonnement de cette fréquence sont les électrons de liaison des molécules, de sorte que les pics d’absorption peuvent être corrélés avec les différents types de liaisons présentes dans le composé. De ce fait, la spectroscopie UV-VIS est utilisée pour identifier les groupes fonctionnels présents dans une molécule. Les bandes qui apparaissent dans un spectre UV-VIS sont larges en raison du chevauchement des transitions vibrationnelles et électroniques.
La lumière a une certaine quantité d’énergie qui est inversement proportionnelle à sa longueur d’onde. Par conséquent, les longueurs d’onde plus courtes de la lumière transportent plus d’énergie et les longueurs d’onde plus longues transportent moins d’énergie. Il faut une quantité spécifique d’énergie pour faire passer les électrons d’une substance à un état d’énergie plus élevé que nous pouvons détecter en tant qu’absorption. Les électrons dans différents environnements de liaison dans une substance nécessitent une quantité spécifique d’énergie différente pour promouvoir les électrons à un état d’énergie plus élevé. C’est pourquoi l’absorption de la lumière se produit pour différentes longueurs d’onde dans différentes substances.
Quelle est l’application d’un spectrophotomètre UV-VIS ?
La spectroscopie ultraviolet-visible (UV-VIS) est une technique largement utilisée dans de nombreux domaines scientifiques, allant de la culture bactérienne à l’identification des médicaments, en passant par les contrôles et la quantification de la pureté des acides nucléiques, le contrôle qualité dans l’industrie des boissons et la recherche chimique.
C’est pourquoi un spectrophotomètre UV-VIS est un instrument utilisé en analyse chimique qui sert à mesurer, en fonction de la longueur d’onde, la relation entre des valeurs de même grandeur photométrique relatives à deux faisceaux de rayonnement et la concentration o des réactions chimiques qui sont mesuré dans un échantillon. Ses applications peuvent être qualitatives et quantitatives. Il est également utilisé dans les laboratoires de microbiologie pour la quantification des micro-organismes.
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